自己包的病毒感染细胞后能看见过表达，但是蛋白表达程度总是不够？怎么优化

293t细胞包装病毒，包装时的10%DMEM中加入1%非必须氨基酸和丙酮酸钠，包装系统是PLVX-PURO（10 μg）、PSPAX2（7.5 μg）、PMD2G（2.5 μg）。在10cm皿中，收取48h（10ml）和72h（10ml）含病毒培养液，混合后用0.22微米的滤膜过滤，分装后保存于-80℃冰箱，使用前化冻，感染时六孔板中细胞融合率大约在50%，病毒体积设置了1ml、3ml、5ml梯度，polybrene浓度为5μg/mL，感染12h后换完全培养液，但是蛋白表达程度并没有随体积而增强，因为加入5ml病毒原液的皿中有很多细胞感染后死亡，所以我感觉病毒量应该够了，想不出原因，有人知道吗？