自己包的病毒感染细胞后能看见过表达,但是蛋白表达程度总是不够?怎么优化
293t细胞包装病毒,包装时的10%DMEM中加入1%非必须氨基酸和丙酮酸钠,包装系统是PLVX-PURO(10 μg)、PSPAX2(7.5 μg)、PMD2G(2.5 μg)。在10cm皿中,收取48h(10ml)和72h(10ml)含病毒培养液,混合后用0.22微米的滤膜过滤,分装后保存于-80℃冰箱,使用前化冻,感染时六孔板中细胞融合率大约在50%,病毒体积设置了1ml、3ml、5ml梯度,polybrene浓度为5μg/mL,感染12h后换完全培养液,但是蛋白表达程度并没有随体积而增强,因为加入5ml病毒原液的皿中有很多细胞感染后死亡,所以我感觉病毒量应该够了,想不出原因,有人知道吗?
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