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慢病毒载体感染肿瘤细胞建系后做裸鼠成瘤,但基因片段很长怎么办?

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我想用慢病毒载体感染肿瘤细胞,构建目的基因过表达的稳转细胞株,以便后续做裸鼠成瘤(皮下成瘤)观察目的基因对肿瘤形成发展的抑制。但是我的目的基因有近5kb,怎么办?


2015-11-25 分享
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小叮当 飘飘何所似ss 0 票

首先,插入片段在5kb的慢病毒基本包不出来(因为还要启动子,各种其他元件,筛选元件等),即使包出来慢病毒滴度也很低,用慢病毒建稳转系成功率很低。如果一定要建稳转系,可考虑质粒载体直接电转进行稳筛,不过周期需要大概3-6个月。

另外,针对这个问题,我不认为非得稳转细胞株才能做后续的裸鼠成瘤实验。5kb包慢病毒难,包腺病毒还是可以实现的。

那么腺病毒可以做裸鼠成瘤吗?其实完全可以,只是腺病毒与肿瘤裸鼠成瘤实验的作用方式,与慢病毒截然不同。慢病毒是先做成稳转株,然后皮下成瘤(当然还有其他成瘤),进一步观察瘤子的发展;腺病毒则是先用野生的肿瘤细胞系成瘤,在瘤子长出可见后(约3周),行瘤内腺病毒注射,以观察转导基因对肿瘤发展的影响。可以这么说,瘤内注射腺病毒对肿瘤进行抑制,比稳转系更有临床治疗的意义。

另外还有一个驳论:目的基因过表达是抑制肿瘤的,为何这样的稳转肿瘤细胞系还能建的成?这个细胞系本身特点是自身生长受到抑制,且可以稳定遗传?如果抑制效率足够高,那这相当于要造一个可以生孩子的太监!其实,针对抑制肿瘤的基因过表达,我的建议是,不要去建什么稳转株,而采取瘤内注射抑制野生瘤体生长的方式更好。腺病毒,腺相关病毒(AAV)行肿瘤瘤体注射,比起稳转株研究肿瘤发展瘤体大小,应该更加合适。

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2015-11-25• 更多
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该问题作者:
莫逸轩
问题更新于:
2015-12-03
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