293t细胞包装病毒，包装时的10%DMEM中加入1%非必须氨基酸和丙酮酸钠，包装系统是PLVX-PURO（10 μg）、PSPAX2（7.5 μg）、PMD2G（2.5 μg）。在10cm皿中，收取48h（10ml）和72h（10ml）含病毒培养液，混合后用0.22微米的滤膜过滤，分装后保存于-80℃冰箱，使用前化冻，感染时六孔板中细胞融合率大约在50%，病毒体积设置了1ml、3ml、5ml梯度，polybrene浓度为5μg/mL，感染12h后换完全培养液，但是蛋白表达程度并没有随体积而增强，因为加入5ml病毒原液的皿中有很多细胞感染后死亡，所以我感觉病毒量应该够了，想不出原因，有人知道吗？

我想用慢病毒载体感染肿瘤细胞，构建目的基因过表达的稳转细胞株，以便后续做裸鼠成瘤（皮下成瘤）观察目的基因对肿瘤形成发展的抑制。但是我的目的基因有近5kb，怎么办？

在研究中经常会遇到病毒载体工具选择的问题，究竟选择何种病毒载体比较合适？各自又有什么优缺点呢？希望专家可以前来作答~

使用慢病毒二代包装系统包病毒，PSPAX2、PMD2G和基因载体的比例是多少啊？

腺病毒或慢病毒病毒能否通过血胎屏障进入胎鼠体内？

用浓缩慢病毒侵染原代小鼠海马神经元时，加入的病毒滴度应该是多少呢？是否需要polybrene？

大鼠原代心肌细胞感染腺病毒，MOI大致需要多少呢？

转染后已经Puro筛选一周的细胞准备做单克隆建稳定细胞系，种到96孔板的单细胞悬液还需要puro去筛选吗。如果筛选，是用puro原来的筛选浓度还是Puro浓度减半维持